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食用菌菌種貯藏技術

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食用菌菌種貯藏技術

1.低温定期移植貯藏法:將需要貯藏的菌種接種在適宜的斜面培養基上,適温培養,當菌絲健壯地長滿斜面時取出,放在3℃-5℃低温乾燥處或4℃冰箱、冰櫃中貯藏,每隔4-6個月時間移植轉管一次,具體應根據菌種特性決定。貯藏時要注意環境温度不能太高,以防黴菌通過棉塞進入管內。因此,若用棉塞,可用乾淨的硫酸紙或牛皮紙包紮棉塞,即可減少污染的機會,也可防止培養基幹燥。除草菇菌種外,其他食用菌菌種都能採用此法貯藏。

2.液體石蠟貯藏法:取化學純液體石蠟(要求不含水分、不黴變)裝於三角瓶中加棉塞幷包紙,在1公斤/平方釐米壓力下滅菌1小時,再放入40℃恆温箱中數天,以蒸發其中水分,至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上,在28℃-30℃温度下培養2-3天,確定無雜菌生長方可使用。然後用無菌操作的方法把液體石蠟注入待貯藏的斜面試管中。注入量以高出培養基斜面1-1.5釐米為宜,塞上橡皮塞,用固體石蠟封口,直立於低温乾燥處貯藏。貯藏時間在1年以上,在低温下,保藏時間還可延長。

3.沙土管貯藏法:取河沙用水浸泡洗滌數次,過60目篩除去粗粒,再用10%鹽酸浸泡2-4小時,除去其中有機物質,再用水沖洗至pH值達到中性,烘乾備用。同時取貧脊土或菜園土用水浸泡,使其呈中性,沉澱後除去上清液,烘乾碾細,用100目篩子過篩,將處理好的沙與土以(2-4):1比例混勻,用磁鐵吸出其中的鐵質,然後分裝小試管或安瓿內,每管裝量0.5-2克,塞棉塞,用紙包紮滅菌(1.5公斤/平方釐米,1小時),再幹熱滅菌(160℃,2-3小時)1-2次,進行無菌檢驗,合格後使用。將已形成孢子的斜面菌種,在無菌條件下注入無菌水3-5毫升,刮菌薹,製成菌懸液,再用無菌吸管吸取菌液滴入沙土管中,以浸透沙土為止。將接種後的沙土管放入盛有乾燥劑的真空乾燥器內,接上真空泵抽氣數小時,至沙土乾燥為止。真空乾燥操作需在孢子接入後48小時內完成,以免孢子發芽。製備好的沙土管用石蠟封口,在低温下可保藏2-10年。

4.濾紙片貯藏法:取白色(收集深色孢子)或黑色(收集白色孢子)濾紙,剪成4釐米×0.8釐米的小紙條,平鋪在培養皿中用紙包裹進行滅菌(1公斤/平方釐米,30分鐘)。採用鈎懸法收集孢子,讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入貯藏試管中,再將貯藏試管放入乾燥器中1-2天,除去濾紙水分,使濾紙水分含量達2%左右,然後低温貯藏。

5.自然基質貯藏法:①麥粒貯藏法。取無癟粒、無雜質的小麥淘洗乾淨,浸泡12-15小時,加水煮沸15分鐘,繼續熱浸15分鐘,使麥粒脹而不破,瀝乾水分攤開晾曬,使麥粒的含水量在25%左右。將碳酸鈣、石膏拌入熟麥粒中(麥粒、碳酸鈣、石膏比例為10公斤:133克:33克),拌和均勻後裝入試管中,每管2-3克,然後清洗試管,塞棉塞,滅菌(1.5公斤/平方釐米,2小時),經無菌檢查合格後備用,試管基質冷卻後接種,適温培養,待菌絲長滿基質後用石蠟塗封棉塞,放低温貯藏。2年左右轉接一次。②麩曲保藏法。取新鮮麩皮,過60目篩除去粗粒。將麩皮和自來水按1:1拌勻,裝入小試管,每管約裝1/3高度,加棉塞用紙包紮,高壓滅菌(1.5公斤/平方釐米,30分鐘),經無菌檢查合格後備用,將生長在斜面培養基上的健壯菌種,移種至無菌麩曲管中,移種時注意儘量搗勻小試管中的麩皮,使其呈疏鬆狀態,在適温下培養至菌絲長滿麩皮為止,將麩曲小管置乾燥器中,在低温或適温下貯藏。

6.生理鹽水貯藏法:取純氯化鈉0.7-0.9克,放入100%毫升蒸餾水中,攪拌均勻分裝試管,每管5-10毫升,進行滅菌(1公斤/平方釐米,30分鐘),經無菌檢查合格後備用,將待保藏的菌種接入馬鈴薯葡萄糖液體培養基中,適温振盪培養5-7天。無菌操作吸取少許培養菌種,注入經檢驗合格的生理鹽水試管中,塞上無菌橡皮塞,用石蠟塗封,在室温或低温貯藏。

7.冷凍真空乾燥法:將已培養、生長豐富的菌體或孢子懸浮於滅菌的血清、卵白、脱脂奶製成的菌懸液上,將懸液以無菌操作分裝於滅菌的玻璃安瓿中,每管0.3-0.5毫升,然後用耐壓橡皮管與冷凍乾燥裝置連接,安瓿放在冷凍槽中於-30℃~-40℃迅速冷凍,然後在冷凍狀態下抽空乾燥,並在真空狀態下熔封安瓿,在-20℃低温下保存,一般可保存10年以上,但成本較高。

8.液氮超低温保藏法:首先將要保藏的菌種製成菌懸液備用,其次準備安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液,塞棉塞滅菌(1公斤/平方釐米,5分鐘)。無菌檢查後,接入要貯藏的菌種,火焰熔封瓶口,檢查是否漏氣,將封好口的安瓿瓶放在凍結器內,以每分鐘下降1℃的速度緩慢降温,使保藏品逐步均勻地凍結,直至-35℃,以後凍結速度就不需控制,安瓿凍結後立即放入液氮罐內,在-150℃~-196℃低温下保藏,該法只有少數科研院所使用。